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Caractérisation de certains gènes polycétones synthases chez Aspergillus Ochraceus NRRL 3174 producteur d'ochratoxine A et d'acide pénicillique

Dao, Huy Phong (2005) Caractérisation de certains gènes polycétones synthases chez Aspergillus Ochraceus NRRL 3174 producteur d'ochratoxine A et d'acide pénicillique. (Characterization of polycetone synthase genes in Aspergillus Ochraceus NRRL 3174 producer of ochratoxin A and penicillic acid.)

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Résumé

Le champignon Aspergillus ochraceus est connu comme producteur de plusieurs polycétones dont les mycotoxines ochratoxines et acide pénicillique. L'étude de la diversité des gènes de polycétones synthases (PKS) chez Aspergillus ochraceus NRRL 3174 a été abordée en utilisant quatre couples d'amorces dégénérées dessinés pour cibler le domaine ketosynthase (3) et le domaine acyltransferase (1). 10 PKS différentes de type I ont été identifiées. Elles sont distribuées dans les trois groupes principaux de PKS : PKS réduite, partiellement réduite et non réduite. Le gène AoLC35-12 est responsable de la production d'ochratoxine A chez A. ochraceus. Le gène aomsas de type 6-methylsalicylique synthase intervient dans la biosynthèse d'acide pénicillique, de patuline, d'asperlactone, d'isoasperlactone, de melleine, d'hydroxymelleine et d'ochratoxine A. Ce gène a été totalement séquencé. Deux couples d'amorces spécifiques ont été synthétisés à partir du gène AoLC35-12. Avec le couple AoOTAL/AoOTAR, uniquement A. ochraceus est détecté par méthode PCR. Avec l'autre couple d'amorces, AoLC35-12L/AoLC35-12R, il est possible de détecter à la fois les producteurs d'ochratoxine A et les producteurs de citrinine. Des amorces spécifiques ont également été développées pour la détection rapide d'A. carbonarius, de P. verrucosum et de P. citrinum. ABSTRACT : Aspergillus ochraceus is known to produce many polyketides including ochratoxins and penicillic acid. The diversity of polyketide synthase (PKS) genes in A. ochraceus NRRL 3174 was investigated by using four degenerate primer pairs targeting ketosynthase domain (3) and acyltransferase domain (1). 10 different type I PKS were identified, and were classed into three main PKS groups: reduced, partially reduced and non reduced. AoLC35-12 gene was found to be involved in OTA biosynthesis. A PKS gene of 6-methylsalicyclic acid synthase type, aomsas, was found to be involved in the biosynthesis of penicillic acid, patulin, asperlactone, isoasperlactone, mellein, hydroxymellein, and ochratoxin A. This gene was completely sequenced. In order to detect ochratoxin A and citrinin producers by using PCR method, two specific primer pairs were generated from AoLC35-12 gene. AoOTAL/AoOTAR can detect only A. ochraceus while AoLC35-12L/AoLC35-12R can detect either ochratoxin A or citrinin producer fungi. Specific primers were also developed to detect A. carbonarius, P. verrucosum and P. citrinum.

Département ou laboratoire:Laboratoire de Génie Chimique - LGC (Toulouse, France)
Directeur de thèse:Lebrihi, Ahmed
Mots-clés:Aspergillus ochraceus – Polycétone – PKS – Ochratoxine A – Acide pénicillique
Sujets:Agronomie > Sciences végétales
Biologie
Déposé le:14 Octobre 2008

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